生物天生具有免疫功能，當(dāng)細(xì)菌、病毒等侵入人體時，在免疫功能正常運作下，就算生病了也能治愈。獲得性免疫缺陷綜合征（AIDS）是由人類免疫缺陷病毒（HIV)所引起的傳染病，hⅳ所攻擊的正是人體免疫系統(tǒng)的中樞細(xì)胞—t4淋巴細(xì)胞，致使人體喪失抵抗能力。艾滋病是一種無法治愈的疾病，確診艾滋病，意味著要長期斗爭，因免疫系統(tǒng)遭受HIV的毀滅性打擊，免疫功能遭到破壞而逐日低下，如果得不到有效控制，最終可導(dǎo)致一系列機(jī)會性感染和惡性腫瘤。在地球上，平均每分鐘都有一個孩子死于艾滋病，有超過1500萬的兒童因為艾滋病而失去父母。中國艾滋病病毒感染人數(shù)在全球居第十四位，更以每年百分之四十的速度遞增，防治艾滋病任重道遠(yuǎn)，需要全社會共同努力。

Nef是一種HIV編碼的輔助蛋白，通過下調(diào)主要的組織相容性I類表達(dá)來躲避被細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞（CTL）殺死，從而增強了致病性，因此急需要一種能恢復(fù)MHC-1的有效Nef抑制劑來促進(jìn)免疫介導(dǎo)的HIV感染細(xì)胞的清除。研究人員發(fā)現(xiàn)在HIV感染的細(xì)胞中MHC-I的恢復(fù)伴隨著CTL介導(dǎo)的感染細(xì)胞清除率的提高，與Nef的基因缺失相當(dāng)。因此研究人員提出CMA作為治療Nef的抑制性先導(dǎo)化合物，以增強免疫介導(dǎo)的HIV感染細(xì)胞的清除。

近日，發(fā)表在《PANS》上的一篇文章描述了一種藥物的發(fā)現(xiàn)，該藥物可以幫助免疫系統(tǒng)消除感染了HIV的難以殺死的細(xì)胞。HIV建立了無法治愈的持久性感染，因此需要開發(fā)新的方法來增強HIV感染細(xì)胞的清除率。HIV編碼Nef，它可以下調(diào)感染細(xì)胞中MHC-1的表達(dá)，從而損害細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞的免疫介導(dǎo)清除。伴刀豆球蛋白A恢復(fù)了MHC-1，并通過細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞增強了HIV感染的原代細(xì)胞的清除率。伴刀球霉素A抵消了針對多種MHC-1同種異型的HIV進(jìn)化枝中的Nef，表明其具有廣泛的治療用途。

天然產(chǎn)物抑制劑的篩選

為了鑒定能夠逆轉(zhuǎn)HIV感染細(xì)胞中MHC-1下調(diào)的Nef抑制劑，研究人員進(jìn)行了高通量流式細(xì)胞術(shù)篩選。選擇HLA-A2作為MHC-1的代表性等位基因，因為Nef強烈靶向HLA-A等位基因以進(jìn)行下調(diào)，HLA-A2在不同族裔中含量很高，并且具有高親和力單克隆抗體有針對HLA-A2的選擇性抗體。篩選了20,000多種天然產(chǎn)物提取物，確定了37種在主篩選中為陽性，在計數(shù)器篩選中為陰性。

Plecomacrolides具有不同的Nef抑制作用和溶酶體中和能力

plecomacrolide治療相關(guān)的毒性可能是由其抑制V-ATPase引起的，V-ATPase抑制了許多細(xì)胞過程，包括溶酶體酸化。為了確定溶酶體pH的抑制是否可能導(dǎo)致表達(dá)Nef的細(xì)胞中MHC-1下調(diào)的逆轉(zhuǎn)，研究人員通過測量比例熒光來測量人類單核細(xì)胞衍生巨噬細(xì)胞的溶酶體pH內(nèi)切葡聚糖。首先證實Baf A1完全中和了溶酶體pH，然后在一定濃度范圍內(nèi)測試了每種plecoacrolides。有趣的是，Nef的最有效抑制劑CMA不是V-ATPase的最有效抑制劑。相反，Baf C1（EC 50 = 7.3 nM）比CMA（EC 50 = 12.7 nM，P < 0.0001）更有效地中和溶酶體，而CMA 與Baf A1（EC 50 = 18.5 nM，P = 0.06）具有可比性。

因為CD4 + T細(xì)胞不能有效地內(nèi)切葡聚糖，所以用Lysotracker Red染料評估了這些細(xì)胞中的溶酶體中和作用，該染料可自由穿過細(xì)胞膜直至到達(dá)酸性隔室，并在那里質(zhì)子化并保留。如通過流式細(xì)胞術(shù)和共聚焦顯微鏡，則EC 50為在原代CD4溶酶體中和通過CMA + T細(xì)胞顯著抑制比EC 50更高Nef。綜上這些結(jié)果表明，CMA在無毒且不會改變?nèi)苊阁wpH的濃度下抵消了CD4 + T細(xì)胞中的Nef 。

CMA與Nef的基因刪除相比可提高CTL介導(dǎo)的HIV感染細(xì)胞的清除

研究人員假設(shè)CMA可以消除Nef介導(dǎo)的HIV感染細(xì)胞免受HIV特異性CTL的保護(hù)，為了直接對此進(jìn)行測試，進(jìn)行了體外流式細(xì)胞術(shù)CTL殺傷測定。如先前觀察到的感染了Nef缺失病毒的PLAP +原代細(xì)胞被CTL有效清除，相反CTL介導(dǎo)的被Nef病毒感染的細(xì)胞的清除均明顯減少。然而，感染了Nef的病毒并用0.5 nM CMA處理的細(xì)胞恢復(fù)了HLA-A2的表達(dá)，并且PLAP +子集被CTL有效消除。CMA對殺死HIV感染的細(xì)胞的CTL的作用與Nef的基因缺失是無法區(qū)分的，因為感染Nef的病毒的細(xì)胞清除率沒有增加。重要的是，當(dāng)將來自缺乏HLA-A2的供體的靶細(xì)胞與CTL共培養(yǎng)時，無論PLAP +靶細(xì)胞是否用CMA進(jìn)行了處理都沒有減少，驗證了CTL的特異性并證明CMA僅在Nef和特異性抗HIV CTL反應(yīng)同時存在時才增強HIV感染細(xì)胞的清除率。對于兩個測試的CTL克隆，Nef依賴性CMA處理細(xì)胞的殺傷率在統(tǒng)計學(xué)上均具有統(tǒng)計學(xué)意義（P < 0.0001）。這些觀察結(jié)果證實，低劑量CMA處理表達(dá)Nef的細(xì)胞可恢復(fù)HLA-A2，該蛋白正確加載了HIV衍生肽，可以成功地呈遞給CTL而不會損害對CTL衍生的裂解信號的響應(yīng)性。

CMA逆轉(zhuǎn)了原代細(xì)胞中Nef介導(dǎo)的HLA-B的下調(diào)

研究人員試圖確定CMA是否會恢復(fù)HIV感染細(xì)胞中的HLA-B表達(dá)，HLA-B同種異型的序列差異將其分類為HLA-Bw4和HLA-Bw6血清型，每種血清型都可以用單克隆抗體檢測，但是這些抗體與某些HLA-A（Bw4）和HLA-C（Bw6）同種異型具有交叉反應(yīng)。先前研究人員確定了一個供體，該供體對Bw4（B * 51：01）和Bw6（B * 07：02）是雜合的，并且與HLA-C的交叉反應(yīng)性極小，這使研究人員可靠地測量兩個HLA-B等位基因的表達(dá)。觀察到在感染了ΔGPE的細(xì)胞中，HLA-B * 51：01和HLA-B * 07：02均顯著下調(diào)， Nef和CMA對該供體中兩個HLA-B等位基因的影響與一系列供體中HLA-A * 02的影響相似。因此得出結(jié)論，CMA可以有效抵消Nef介導(dǎo)的原代CD4 + T細(xì)胞中HLA-A和HLA-B同種異型的下調(diào)。